Revista de Pesquisa e Inovação Farmacêutica, Vol. 2, No 1 (2010)

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CARACTERIZAÇÃO DE LIPASES EM ARTHROPODA

Carlos Felipe Tasso, Adriana Rios lopes

Resumo


Lipases são carboxil-esterases (EC 3.1.1.3) importantes para a digestão de triacilgliceróis pouco caracterizadas em Arthropoda. A quantificação da atividade de lipase foi realizada utilizando amostras de intestino ou hepatopâncreas de 10 diferentes espécies de Arthropoda. Dentre as espécies estudadas foram escolhidas as lipases de Tityus serrulatus, Nephilengys cruentata, Periplaneta americana, Diatraea saccharalis e Spodoptera frugiperda para caracterização mais detalhada. A caracterização das propriedades bioquímicas das lipases destes animais foi feita através de experimentos de pH ótimo, estabilidade ao pH, determinação das massas moleculares, efeito da concentração de substrato, determinação de especificidade com a utilização de diferentes substratos, efeito da presença de cloreto de cálcio, determinação do ponto isoelétrico, inativação térmica e separações cromatográficas. De uma maneira geral, as lipases de Arthropoda são ativas em uma faixa de pH alcalino (7,0 – 9,0), têm massa molecular da ordem de 50 kDa, têm pI da ordem de 6,0, são estáveis em ampla faixa de pH. Foi possível evidenciar que estas enzimas apresentam especificidades distintas nos diferentes animais estudados. Tityus serrulatus foi escolhido como modelo para isolamento das lipases digestivas. Para a purificação das lipases digestivas do hepatopâncreas de Tityus serrulatus foram utilizados dois passos. Uma cromatografia de troca catiônica (Hitrap S), no qual são separadas duas atividades de lipase denominadas Lip1 e Lip2, sendo Lip2 a atividade majoritária. As frações correspondentes a Lip2  foram aplicadas em uma coluna de troca aniônica (Resource Q). As frações ativas foram submetidas a eletroforese demonstrando o enriquecimento de uma proteína.


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